CRISPR/Cas9 기반 종양미세환경 내 유전자 발현 조절의 기능적 검증 기법

이 기법은 CRISPR 유전자 편집 시스템을 이용하여 종양 미세환경(Tumor Microenvironment, TME) 내 특정 유전자의 발현을 체계적으로 교란시키고, 그 결과로 발생하는 표현형적 변화를 분석하는 것을 목표로 합니다.

기능적 스크리닝 접근법

• Pooled Screening: 라이브러리 형태로 제작된 gRNA들을 사용하여 다수의 타겟 유전자를 동시에 녹아웃(knockout)하며, 이후 살아남은 세포 집단을 FACS 등을 통해 선별하여 유전자 기능과의 상관관계를 분석합니다.
• Single-Cell Profiling: 단일세포 분석과 결합하여, TME 내 다양한 세포 유형(면역세포, 암세포 등) 각각에서 유전자 조작의 영향을 공간적으로 확인하고, 어떤 세포 유형에서 가장 큰 표현형 변화가 나타나는지 추적할 수 있습니다.

이를 통해 종양미세환경의 복잡한 상호작용 속에서 암 진행에 필수적인 핵심 유전자를 높은 효율로 식별할 수 있으며, 이는 궁극적으로 면역항암치료 전략 개발의 표적 검증에 활용됩니다. 유전자 발현 조절의 인과 관계를 증명하는 데 핵심적인 역할을 수행합니다.